Tách chiết là gì? Các công bố khoa học về Tách chiết

Một quy trình được mô tả để tinh chế quy mô lớn RNA mRNA chuỗi nhẹ (L) và chuỗi nặng (H) từ các khối u plasmacytoma được sản xuất ở chuột. RNA nguyên vẹn được kết tủa chọn lọc với hiệu suất cao từ các khối u đông lạnh được đồng hóa trong 3 M LiCl và 6 M urê. RNA mRNA chuỗi L và H được tinh chế bằng sắc ký oligo(dT)-cellulose và hoặc bằng ly tâm gradient sucrose trong các điều kiện ngăn ngừa sự kết tụ hoặc bằng phương pháp điện di gel chuẩn bị phân giải cao trong điều kiện không biến tính. RNA mRNA γ2a và α chuỗi nặng lắng đọng như các thành phần chính ở 15,5 S và 16,5 S tương ứng, khi RNA mRNA chuỗi L lắng đọng ở dạng 12-S. RNA mRNA chuỗi H được tách ra bằng cách rửa liên tục trong quá trình điện di gel chuẩn bị hoàn toàn phân lập khỏi cả RNA mRNA chuỗi L và rRNA 18-S còn lại, và di chuyển như các thành phần đơn lẻ có kích thước 1900 ± 50 nucleotide trên các gel phân giải biệt hóa phân tích. Các RNA mRNA chuỗi H đã được tinh chế một phần được dịch mã thành các thành phần chính có trọng lượng phân tử 56000 (γ2a) và 60000 (α) trong lysate reticulocyte thỏ phụ thuộc vào mRNA, trong khi RNA mRNA chuỗi L tạo ra các polypeptide có trọng lượng phân tử 25000 (λ) và 27000 (к). Tối đa 95% các sản phẩm dịch mã do các mRNA tinh chế hướng dẫn đã được kết tủa miễn dịch bằng cách sử dụng huyết thanh kháng thể đặc hiệu. Độ tinh khiết của các RNA mRNA chuỗi L và H được đánh giá bằng cách lai cDNA tương ứng với DNA plasmid tái tổ hợp dư thừa. Các kết quả cho thấy độ tinh khiết tối thiểu là 47% (γ2a), 62% (α) đối với RNA mRNA chuỗi H và 60% (к) đối với RNA mRNA chuỗi L.

Trong khuôn khổ một chương trình nhằm cải thiện công nghệ thu hồi chiết xuất các sản phẩm từ quá trình lên men hiện có, trạng thái hiện nay của công nghệ được xem xét một cách phê bình. Các axit được xem xét bao gồm axit propionic, axit lactic, axit pyruvic, axit succinic, axit fumaric, axit maleic, axit malic, axit itaconic, axit tartaric, axit citric, và axit isocitric, tất cả đều được thu nhận thông qua quá trình lên men aerôbic của glucose qua con đường glycolytic và bypass glyoxylate. Không có ngoại lệ nào, chính là axit đơn phân không phân ly được chiết vào các chất chiết xuất có khả năng tạo liên kết với oxy chuẩn và liên kết phốt pho. Trong pha hữu cơ, các axit này thường được dimer hóa. Quá trình chuyển tải chiết xuất tuân theo định luật Nernst, các hệ số phân tách đo được dao động từ khoảng 0.003 đối với hydrocacbon no đến khoảng 2 đến 3 đối với cồn aliphatic và ketone đến khoảng 10 hoặc lớn hơn đối với organophosphate. Các tỷ lệ phân phối cao tương tự cũng được đo khi sử dụng amin bậc ba chuỗi dài làm chất chiết xuất, hình thành các muối cồng kềnh ưu tiên hòa tan trong pha hữu cơ.

Trà là nguồn chính của catechin, một hợp chất đã trở nên nổi tiếng nhờ khả năng chống oxy hóa. Nhiều nghiên cứu trên người, động vật và in vitro đã liên kết catechin trong trà với việc ngăn ngừa một số loại ung thư, giảm nguy cơ béo phì, tiểu đường và bệnh tim mạch, cũng như cải thiện hệ thống miễn dịch. Các catechin trong trà được sử dụng rộng rãi trong nhiều sản phẩm dược phẩm, thực phẩm chức năng và mỹ phẩm để nâng cao tuổi thọ sản phẩm hoặc cải thiện sức khỏe con người. Do đó, nhu cầu về catechin đã tăng lên đáng kể. Catechin đã được chiết xuất và tách riêng từ lá trà bằng nhiều phương pháp qua một số bước khác nhau bao gồm: xử lý lá trà, chiết xuất catechin từ trà vào dung môi, tách isolat catechin khỏi các thành phần khác đã được chiết xuất, và sấy khô các chế phẩm để thu được chiết xuất catechin dưới dạng bột. Bài báo này tóm tắt các đặc điểm vật lý và hóa học của catechin trà và xem xét các bước chiết xuất trong các phương pháp chiết xuất khác nhau, như một cơ sở để cải thiện và phát triển thêm quy trình chiết xuất và tách isolat catechin trà.

2′,6′-Dihydroxy-4′-methoxychalcone (DMC) đã được tinh chế từ chiết xuất dichloromethane của hoa câyPiper aduncum. DMC cho thấy hoạt động đáng kể in vitro chống lại promastigotes và amastigotes nội bào củaLeishmania amazonensis, với liều hiệu quả 50% lần lượt là 0,5 và 24 μg/ml. Tác dụng ức chế trên amastigotes rõ ràng là một tác động trực tiếp lên ký sinh trùng và không phải do sự kích hoạt chuyển hóa nitrogen oxide của đại thực bào, vì sự sản sinh nitric oxide của các đại thực bào không được kích thích và được kích thích bởi gamma interferon tái tổ hợp đều giảm hơn là tăng khi sử dụng DMC. Hoạt động thực bào của đại thực bào vẫn hoạt động bình thường ngay cả với nồng độ DMC cao tới 80 μg/ml, quan sát bằng kính hiển vi điện tử và khả năng hấp thụ các hạt được gắn nhãn bằng fluorescein isothiocyanate. Các nghiên cứu cấu trúc siêu vi cũng cho thấy rằng trong sự hiện diện của DMC, ty thể của promastigotes bị phình to và mất tổ chức. Dù tiêu diệt amastigotes nội bào, nhưng không có sự xáo trộn cơ quan đại thực bào nào được quan sát thấy, ngay cả ở 80 μg DMC/ml. Những quan sát này gợi ý rằng DMC có độ độc chọn lọc đối với ký sinh trùng. Cấu trúc đơn giản của nó có thể giúp DMC trở thành một hợp chất đầu mới cho việc tổng hợp các loại thuốc chống leishmania mới.

Bệnh thối vòng ở khoai tây, do vi khuẩn Clavibacter michiganensis phân loài sepedonicus gây ra, là một trong những bệnh được kiểm soát một cách nghiêm ngặt ở khoai tây trên toàn thế giới. Tổ chức này thường khó phát hiện ở những củ không có triệu chứng do số lượng vi khuẩn thấp và sự phát triển cạnh tranh chậm trên các môi trường có sẵn. Các primer phản ứng chuỗi polymerase (PCR) và một probe huỳnh quang được thiết kế để sử dụng trong hệ thống phát hiện PCR thời gian thực tự động Perkin Elmer 7700 (TaqMan) đã được phát triển từ một đoạn gen DNA đặc hiệu cho C. michiganensis phân loài sepedonicus nhằm phát triển một phương pháp xét nghiệm BIO-PCR cho C. michiganensis phân loài sepedonicus trong các củ khoai tây. Kết quả từ việc sàng lọc các primer với các chủng của C. michiganensis phân loài sepedonicus và các loại vi khuẩn khác cho thấy các primer có tính đặc hiệu. Tổng cộng đã lấy mẫu 30 củ khoai tây nghi ngờ bị nhiễm bệnh thối vòng bằng quy trình chiết xuất lõi và ủ lắc và được xét nghiệm bằng (i) cấy aliquots lên môi trường agar, (ii) PCR cổ điển, và (iii) BIO-PCR. Trong số đó, 4 củ cho kết quả dương tính qua cấy trên agar và thử nghiệm độc lực, 8 củ qua PCR cổ điển TaqMan, và 26 củ qua TaqMan BIO-PCR. Chúng tôi kết luận rằng BIO-PCR kết hợp với hệ thống phát hiện khép kín tự động TaqMan là một phương pháp nhanh chóng, đáng tin cậy trong việc phân tích số lượng lớn các mẫu chiết xuất từ củ khoai tây cho C. michiganensis phân loài sepedonicus. Hơn nữa, đối với một phòng thí nghiệm trung tâm lớn sử dụng số lượng lớn các xét nghiệm PCR, hệ thống TaqMan có thể giảm chi phí trên mỗi mẫu so với phương pháp PCR cổ điển tốn nhiều công sức hơn.

Chúng tôi đã kiểm tra tác động của thành phần chế độ ăn và nhịn ăn đối với quá trình lipolysis của các tế bào mỡ vừa được tách chiết từ cá chim trắng (Sparus aurata). Chúng tôi cũng đã phân tích tác động của insulin, glucagon và hormone tăng trưởng (GH) trên các tế bào mỡ được tách chiết từ cá được cho ăn chế độ ăn khác nhau. Quá trình lipolysis cơ bản, được đo bằng cách đo sự phóng thích glycerol, tăng tỷ lệ với nồng độ tế bào và thời gian ủ, điều này xác nhận tính phù hợp của các chế phẩm tế bào này để nghiên cứu sự điều hòa hormone của quá trình chuyển hóa này. Cá chim trắng được cho ăn hai chế độ ăn khác nhau, FM (100% bữa ăn từ cá) và PP (100% protein từ thực vật cung cấp từ nguồn thực vật) trong 6 tuần. Sau thời gian này, mỗi nhóm chế độ ăn được chia thành hai nhóm: được cho ăn và nhịn ăn (trong 11 ngày). Quá trình lipolysis cao hơn đáng kể ở các tế bào mỡ từ cá được cho ăn PP so với các tế bào mỡ từ cá được cho ăn FM. Nhịn ăn đã kích thích sự gia tăng đáng kể trong tỷ lệ lipolytic, khoảng gấp ba lần trong các tế bào mỡ được tách chiết bất kể lịch sử dinh dưỡng. Tác động của hormone tương tự trong các nhóm khác nhau: glucagon làm tăng tỷ lệ lipolytic, trong khi insulin hầu như không có tác động. GH rõ ràng có tác dụng lipolytic, mặc dù sự gia tăng tương đối của glycerol so với nhóm đối chứng thấp hơn ở các tế bào mỡ tách chiết từ cá nhịn ăn so với cá được cho ăn. Nhìn chung, chúng tôi chứng minh lần đầu tiên rằng quá trình lipolysis, được đo trong các tế bào mỡ tách chiết từ cá chim, bị ảnh hưởng bởi trạng thái dinh dưỡng của cá. Hơn nữa, số liệu của chúng tôi cho thấy rằng glucagon và đặc biệt là GH đóng một vai trò quan trọng trong việc kiểm soát quá trình lipolysis của tế bào mỡ.